MSH2 (G219-1129)抗体试剂创新体外诊断试剂注册技术审评报告

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

　　1支5mL的VENTANAanti-MSH2 (G219-1129)抗体分配器含有约 100μg的鼠单克隆抗体(IgG1)。抗体已经过含有0.3%载体蛋白、Brij35和0.05% ProClin300(防腐剂)的磷酸盐缓冲液稀释处理。特异性抗体浓度约为20μg/mL。(具体内容详见产品说明书)

（二）产品预期用途

　　本产品用于体外定性检测经福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的实体瘤组织切片中的MSH2蛋白。MSH2 (G219-1129)抗体试剂(免疫组织化学法)需与PMS2(A16-4)抗体试剂(免疫组织化学法)、MLH1(M1)抗体试剂(免疫组织化学法)以及MSH6(SP93)抗体试剂(免疫组织化学法)一起使用，预期作为辅助识别适合帕博利珠单抗注射液(可瑞达/Keytruda)治疗的实体瘤患者的伴随诊断。

（三）产品包装规格

　　50测试/盒。

（四）产品检验原理

　　VENTANA anti-MSH2(G219-1129)是针对一种重组MSH2蛋白的鼠单克隆抗体。VENTANA anti-MSH2(G219-1129)抗体与FFPE组织切片中的MSH2蛋白结合。可以使用一种半抗原化的二抗以及随后使用一种多聚体抗半抗原-HRP偶联物(DAB染色液)对该抗体进行定位。然后，利用沉淀的酶反应产物便可显现特异性抗体-酶复合物。每个步骤都以精确的时间和温度孵育。在每一步孵育结束时，BenchMarkULTRA或BenchmarkULTRAPLUS仪器都会冲洗切片，以停止反应并去除未结合物质，因为这些物质会阻碍后续步骤中所需的反应。它还应用缓冲液ULTRALCS(Predilute)，可最大限度地减少样本玻片上水性试剂的蒸发。

　　除了采用VENTANAanti-MSH2(G219-1129)抗体染色外，还应使用鼠单克隆阴性试剂(鼠单克隆阴性质控抗体)对第二张玻片进行染色。阴性试剂质控用于评估背景染色。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

　　1.主要原材料的选择

　　本产品的主要原材料为抗MSH2 鼠单克隆抗体，该抗体是重组抗体，由外购获得，申请人选择有资质的供应商，并结合原材料特性，通过功能性实验，确定了原材料的质量要求，并检验合格。

　　2.质控设置情况

　　该产品明确了检测过程中的质量控制程序，推荐了内部阳性质控、阳性组织质控和配套使用的阴性试剂质控品，具体见说明书【检测方法】部分。

（二）生产工艺及反应体系研究

　　申请人对工艺的研究包括工艺运行和工艺性能两方面。通过工艺运行研究，确定合适的混合时间，并在此基础上进行工艺性能研究，结果符合接受标准。

　　以前期研究结果为建立依据，申请人对各个染色条件进行了优化，最终在BenchmarkULTRA平台上确定了最佳的反应体系。

（三）分析性能评估

　　本产品的分析性能包括免疫反应性、灵敏度和特异性、准确度和精密度研究。

　　1.免疫反应性研究

　　申请人对正常人体组织进行免疫反应性研究，并对着色位置及特点进行记录，每种组织类型均不少于 3例。在检测的组织类型中并没有观察到超出预期的结果，结果总结见下表：

　　表1正常组织免疫反应检测结果

组织	阳性病例数量/总体病例数量	组织	阳性病例数量/总体病例数量
肾上腺	3/3	肺	3/3
膀胱	3/3	淋巴结	3/3
骨髓	3/3	间皮	3/3
卵巢	5/5	胰腺	3/3
乳腺	3/3	甲状旁腺	3/3
小脑	3/3	周围神经	5/5
大脑	3/3	前列腺	3/3
宫颈	3/3	骨骼肌	3/3
结肠	3/3	皮肤	3/3
子宫内膜	3/3	脾	3/3
食道	3/3	胃	3/3
心脏	1/3	睾丸	3/3
垂体	3/3	胸腺	3/3
肠	3/3	甲状腺	3/3
肾脏	3/3	舌/唾液腺	2/3
肝脏	3/3	扁桃体	3/3

　　注：错配修复蛋白(如MSH2)存在于所有活跃的增殖细胞中。对于所有组织，在正常质控品细胞(淋巴细胞、成纤维细胞和上皮细胞)呈阳性染色的情况下，确定组织特异性成分的阳性/阴性染色结果。

　　申请人对42 种相关良性、恶性病变组织(非正常组织)进行免疫反应性研究，并对着色位置及染色特点进行记录。在检测的肿瘤类型中没有观察到超出预期的结果，结果总结见下表：

　　表2 非正常组织免疫反应性检测结果

病理组织	阳性病例数量/总体病例数量
胶质母细胞瘤（大脑）	1/1
脑膜瘤（大脑）	1/1
室管膜瘤（大脑）	1/1
少突胶质细胞瘤（大脑）	1/1
浆液性腺癌（卵巢）	1/1
腺癌（卵巢）	1/1
胰腺神经内分泌肿瘤（胰腺）	1/1
腺癌（胰腺）	1/1
精原细胞瘤（睾丸）	2/2
髓样癌（甲状腺）	1/1
乳头状癌（甲状腺）	1/1
导管原位癌（乳腺）	1/1
微浸润性导管癌（乳腺）	1/1
浸润性导管癌（乳腺）	1/1
B细胞淋巴瘤；NOS（脾）	1/1
小细胞癌（肺）	1/1
鳞状细胞癌（肺）	1/1
腺癌（肺）	1/1
神经内分泌癌（食道）	1/1
腺癌（食道）	1/1

病理组织	阳性病例数量/总体病例数量
印戒癌（胃）	1/1
腺癌（小肠）	1/1
间质肉瘤（小肠）	1/1
腺癌（结肠）	1/1
腺癌（直肠）	1/1
胃肠道间质瘤（GIST）（直肠）	1/1
肝母细胞瘤（肝脏）	1/1
透明细胞癌（肾脏）	1/1
腺癌（前列腺）	2/2
平滑肌瘤（子宫）	1/1
腺癌（子宫）	1/1
鳞状细胞癌（宫颈）	2/2
胚胎性横纹肌肉瘤（横纹肌）	1/1
鳞状细胞癌（皮肤）	1/1
神经母细胞瘤（腹膜后）	1/1
间皮瘤（腹膜）	1/1
B细胞淋巴瘤；NOS（淋巴结）	2/2
霍奇金淋巴瘤（淋巴结）	1/1
平滑肌肉瘤（膀胱）	1/1
骨肉瘤	1/1
平滑肌肉瘤（平滑肌）	1/1
纤维神经瘤	2/2

　　注：错配修复蛋白(如MSH2)存在于所有活跃的增殖细胞中。对于所有组织，在正常质控品细胞(淋巴细胞、成纤维细胞和上皮细胞)呈阳性染色的情况下，确定肿瘤细胞的阳性/阴性染色结果。

　　2.灵敏度

　　采用不同器官系统的实体瘤人群的组织样本中dMMR的发生率来评估分析灵敏度。泛肿瘤组织样本中 MMR缺陷型的总体发生率及单标志物发生率均小于6%，MSH2 缺失病例的总体患病率百分比为0.8%发生率。

　　3.分析特异性

　　通过免疫印迹分析，对该产品的特异性进行了评估，证明抗体能够特异性检测预测分子量的蛋白质。在 MSH2野生型细胞系中显示了预期分子量(～105kDa)条带。在MSH2敲除细胞系中没有观察到预期条带。该结果显示了申报产品的特异性。

　　对该产品进行了肽抑制的研究。研究表明，该产品的结合表位包含在MSH2的肽序列中，申报产品可以特异性结合目标表位。

　　4.准确性研究

　　进行了与基于PCR方法的MSI检测试剂的实体瘤的比对研究，在 135 例实体瘤样本中，总体符合率为98.5%(95% CI：94.8%，99.6%)，阳性符合率为98.5%(95% CI：91.8%，99.7%)，阴性符合率为98.6%(95% CI：92.3%，99.7%)。所有符合率均

　　在90%以上，并且95% CI下限也均在90%以上。

　　进行了与其他相同方法学抗体试剂的方法学比对研究。在1335 例实体瘤样本中，对于MSH2，阳性一致率为100%(95%CI：95.82%，100.00%)，阴性一致率为99.76%(95% CI：99.30%，99.92%)，总体一致率为总符合率为99.78%(95%CI: 99.34%，99.92%)。

　　5.精密度

　　申请人在适用仪器上进行了实验室内精密度研究，包括批间，批内/运行内、日内、日间研究;阅片一致性研究，包括不同阅片员之间、同一阅片者不同阅片时间研究;外部重复性研究，包括不同实验室之间、不同阅片员间以及不同染色日间精密度研究，该研究在 3个不同的实验室完成。上述研究结果表明该试剂检测精密度良好。

（四）阳性判断值或参考区间研究

　　通过药物临床试验确定该产品的阳性判断值。有效性结果显示，在既往标准治疗失败的MSI-H/dMMR肿瘤患者中，帕博利珠单抗治疗在ORR及持续缓解方面均具有临床意义的获益。VENTANAMMRRxDxPanel适用于鉴别可接受帕博利珠单抗治疗的中国患者。VENTANAMMRRxDxPanel能够有效筛选适合接受帕博利珠单抗治疗的dMMR型实体瘤患者。

　　该产品需与PMS2(A16-4)抗体试剂(免疫组织化学法)、 MLH1(M1)抗体试剂(免疫组织化学法)以及MSH6(SP93)抗体试剂(免疫组织化学法)一起使用，联合判读，确定患者的MMR状态，即：

完整型	缺陷型
检测组合中所有4 个标志物（MLH1、 PMS2、MSH2和MSH6）均表现出完整的蛋白表达	检测组合中至少1 个标志物（MLH1、 PMS2、MSH2和MSH6）表现出蛋白表达缺失

（五）稳定性研究

　　申请人对申报产品的实时稳定性、使用稳定性和运输稳定性进行了系统的研究，确定了在各种条件下试剂的有效保存时间，同时也对样本稳定性进行了研究。

　　实时稳定性:使用三批2℃~8℃保存的试剂盒，分别在第0天、第6 个月、第14 个月、第20 个月和第26 个月对结肠癌和直肠癌(CRC)进行染色，结果符合接受标准。因此确定申报产品在2～8℃条件下保存，有效期24 个月。

　　此外，样本稳定性和试剂运输及使用稳定性研究结果支持说明书声称。

三、临床评价概述

　　申请人在辽宁省肿瘤医院、上海交通大学医学院附属仁济医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、中山大学肿瘤防治中心、浙江大学医学院附属第二医院共 5家临床机构完成了临床试验，同时通过桥接试验以及同步开发的方式完成了伴随诊断意义的研究。本次临床试验分为如下三部分。

　　第一部分：采用试验体外诊断试剂与对比试剂进行比较研究，评价试验体外诊断试剂的临床检测性能。

　　对比试剂选择已上市、具有良好可比性的MSH2抗体试剂(免疫组织化学)。临床试验共入组 1618例实体瘤患者，样本类型为FFPE样本。其中，结直肠癌402 例，胃癌369 例，子宫内膜癌413 例，其他实体瘤434 例。

　　试验结果显示，MSH2 判读结果的阳性符合率为 99.56%(95%CI：97.56%，99.92%)，阴性符合率为99.78%(95%CI：99.37%，99.93%);联合其他3 个标志物(MLH1、PMS2、MSH6)共同判读 MMR蛋白状态，判读结果的阳性符合率为 99.81%(95%CI：98.95%，99.97%)，阴性符合率 99.72%(95%CI：99.19%，99.91%)。

　　第二部分：与其他 3 个标志物(MSH6、PMS2、MSH2)联合，通过桥接研究，评价 4项标志物联合检测对于帕博利珠单抗的伴随诊断性能。

　　首先采用本产品与关键药物临床试验 CTA进行一致性研究，共入组 943例样本，阳性样本277例，阴性样本666例，其中包括药物关键临床试验样本、肿瘤库样本等。样本类型为FFPE样本。结果显示：试验体外诊断试剂与CTA 的阳性符合率为72.2%( 95%CI：66.7%，77.1%)，阴性符合率为98.5%(95%CI：97.3%，99.2%)。

　　此外，纳入关键药物临床试验样本进行桥接试验，本次桥接纳入病例203例，试验体外诊断试剂检测阳性为 134例。对于药物临床试验中的主要评价指标，上述 134 个样本来源病例的客观缓解率(ORR)为40.3%(95%CI：31.9%,49.1%)，与药物临床试验结果基本一致;对于药物临床试验中的次要评价指标也进行了充分评价，结果显示，上述 134个病例的次要评价指标的结果也与药物临床试验中结果基本一致;同时，针对脱落样本进行了敏感性和插补分析。

　　第三部分：采用与抗肿瘤药物同步开发的方式，评价试验体外诊断试剂对于帕博利珠单抗的伴随诊断性能。

　　申请人提供了KEYNOTE-158 L队列的药物临床研究资料。该临床试验是一项多中心、开放性关键性Ⅱ期研究，评估该药物在中国既往一线治疗失败局部晚期或转移性 dMMR/MSI-H型实体瘤患者中的有效性和安全性。在这项临床试验中，共30例 dMMR/MSI-H 型实体瘤患者纳入了有效性统计分析，其中21 例采用4 项标志物联合检测为dMMR患者。多中心临床试验结果显示：ORR为66.7%(95%CI：47.2%，82.7%)。

　　综上所述，临床试验结果显示该产品临床性能满足临床要求。

四、产品受益风险判定

　　经综合评价，本产品的受益和风险总结如下：

　　通过性能验证以及临床试验证明了本产品的分析性能及临床性能，可支持其在临床研究中的预期用途，保证其有效和安全使用。MSH2(G219-1129)抗体试剂(免疫组织化学法)的预期收益是与PMS2 (A16-4)抗体试剂(免疫组织化学法)、MLH1(M1)抗体试剂(免疫组织化学法)以及MSH6(SP93)抗体试剂(免疫组织化学法)一起使用，预期作为辅助识别适合KEYTRUDA(帕博利珠单抗)治疗的实体瘤患者的伴随诊断。

　　当按照其规定的预期用途使用时，器械将实现其预期临床受益。产品受益超过其剩余风险。风险管理计划已得到适当实施，并制定了获取生产和生产后信息的方法。

　　为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，在说明书中提示以下信息：

　　1.本产品用于体外定性检测经福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的实体瘤组织切片中的MSH2蛋白。MSH2 (G219-1129)抗体试剂(免疫组织化学法)与PMS2(A16-4)抗体试剂(免疫组织化学法)、MLH1(M1)抗体试剂(免疫组织化学法)以及MSH6(SP93)抗体试剂(免疫组织化学法)一起使用，预期作为辅助识别适合KEYTRUDA(帕博利珠单抗)治疗的实体瘤患者的伴随诊断。VENTANAMMRRxDxPanel的结果应由有资质的病理学家结合组织学检查、相关临床信息以及适当的质控进行解释。本抗体预期供体外诊断(IVD)使用。

　　2.警示及注意事项如下：

　　VentanaMedicalSystems, Inc.提供最佳稀释度的抗体和试剂，以便按照提供的说明使用。偏离染色方案中列出的推荐抗原修复(细胞前处理)条件可能造成预期结果无效。应当使用适当的质控品并记录在案。

　　VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) 抗 体 仅获准在BenchMarkULTRA与BenchMarkULTRAPLUS仪器上与DAB染色液(OptiViewDABIHCDetectionKit)联合使用，未获准与任何其他检测方法或自动化染色仪器联合使用。

　　在说明书中强调了可能难以判读的染色情况的结果解读。