核酸扩增检测试剂商用反应液注册申报全攻略

　　在体外诊断领域，核酸扩增法检测试剂的应用越来越广泛。这类试剂的核心是核酸扩增反应液，它直接决定了检测的灵敏度和准确性。但很多企业在申报注册时，面对商用反应液的多组分特性，常常陷入“每个组分都要单独验证”的误区。本文结合最新法规，梳理如何科学高效地完成这类产品的注册申报。

​第一步：分类确认反应液属性​

　　商用核酸扩增反应液通常包含dNTP、酶混合物、缓冲液等十几种组分。按照《体外诊断试剂主要原材料研究注册审查指导原则》，这类复合型反应液可视为“核心反应体系原材料”中的功能单元，无需拆解每个成分单独研究。比如某企业的流感检测试剂采用某品牌商用反应液，只需整体评估其性能，而不必逐项分析其中的Taq酶纯度或dNTP浓度。

　　关键要确认两点：

　　​功能完整性​：反应液是否覆盖扩增所需的全部生化反应要素

　　​供应稳定性​：生产商能否提供连续三批次的质检报告

​第二步：开展验证研究​

　　验证研究是申报的核心环节，需覆盖三个维度：

　　具体操作要点：

　　批次验证需包含极端储存条件(如冻融5次后的性能)

　　扩增效率测试建议覆盖5个浓度梯度(例如10⁶~10¹ copies/μL)

　　干扰物质测试需模拟临床最差条件，如痰液样本中粘蛋白含量≥5mg/mL

　　某企业曾在新冠试剂申报时，因未测试反应液与磁珠法提取试剂的兼容性，导致审评退回补充实验。这提示验证需覆盖核酸提取全流程。

​第三步：建立质量标准​

　　商用反应液的质量标准应包含两类指标：

　　​客观指标​：

　　外观(液体澄清度、无沉淀)

　　pH值范围(如7.8-8.2)

　　功能性检测(用标准质控品验证扩增曲线)

　　​供应商管理​：

　　要求生产商提供每批次的质检报告(COA)

　　关键组分变更需提前通知(如酶来源从动物源性改为重组表达)

　　特别要注意反应液中的UNG酶活性。曾有企业因未验证UNG酶的热稳定性(要求95℃处理10分钟后仍能降解95%的dUTP)，导致假阳性风险升高。

​第四步：稳定性评估​

　　稳定性研究需模拟真实使用场景：

　　​实时稳定性​：在2-8℃保存至有效期后，检测灵敏度下降不超过1个数量级

　　​开瓶稳定性​：开封后反复冻融3次，Ct值偏移≤0.5

　　​运输验证​：模拟夏季高温(40℃)运输7天，性能符合要求

　　某肠道病毒检测试剂的数据显示，商用反应液在37℃加速试验14天后，扩增效率从98%降至85%，因此明确标注“运输过程需冷链保护”。

​第五步：整合申报材料​

　　最终提交的资料需形成证据链：

　　​反应液选择依据​：比对了3个品牌反应液的扩增效率数据

　　​验证报告​：包含上述批次、效率、干扰测试的原始数据

　　​质量标准文件​：附供应商的COA及质量协议

　　​稳定性声明​：声明“未改变反应液原始包装及储存条件”

　　特别注意：若反应液包含专利成分(如某酶的突变体)，需取得供应商的授权证明。

　　通过这五步策略，企业能大幅减少重复性工作。数据显示，采用该方法的申报案例平均审评周期缩短至8个月，比传统方式快40%。未来随着更多预混式反应液的普及，这种“整体评估+关键验证”的模式将成为行业主流。