人类免疫缺陷病毒 1 型（HIV-1）DNA 检测试剂盒医疗器械产品注册技术审评报告

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

　　本产品含有HIV-1DNA反应液A、HIV-1DNA反应液B、HIV-1DNA内标溶液、阴性质控品、HIV-1DNA阳性质控品，主要组成成分见表1。

　　表1 试剂盒主要组成成分

（二）产品预期用途

　　本产品用于体外定性检测人全血样本中的人类免疫缺陷病毒1型脱氧核糖核酸(HIV-1 DNA)(仅M组)。

　　本产品仅用于 HIV-1 型感染的辅助诊断，临床医生可参考本产品检测结果，结合病例的实际情况及多方检查结果进行综合判断。本产品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。本产品不可作为血液或血液制品 HIV筛查使用。

（三）产品包装规格

　　24人份/盒;48人份/盒。

（四）产品检验原理

　　本产品利用荧光PCR技术，针对人类免疫缺陷病毒 1型基因设计特异性引物和探针，配以热启动 DNA聚合酶等成分组成核酸扩增试剂，使用荧光PCR仪进行PCR扩增，并检测荧光信号，从而对HIV-1 DNA进行检测。

　　本产品添加了相关的防污染组分(尿嘧啶糖基化酶)，其作用机理是选择性水解断裂含有dU的双链或者单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的 DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

　　1.主要原材料的选择

　　本产品生产工艺过程所用的主要原材料包括引物、探针、热启动Taq酶、UDG酶、dNTPs、含HIV-1DNA 内标片段的质粒、8E5细胞核酸。其中，引物、探针、热启动Taq酶、UDG酶、含HIV-1 DNA内标片段的质粒、8E5细胞核酸由申请人自行生产，dNTPs为外购。申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性试验，筛选出合格供应商，并制定了各主要原材料的质量要求并经检验合格。

　　2.企业参考品及质控品的设置

　　申请人设置了企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检测限参考品、精密度参考品。各项企业参考品综合用于产品检测最低检测限、特异性和重复性评价。阳性参考品、最低检测限参考品及精密度参考品为全血样本或培养物。阳性参考品为不同型别及浓度水平的 HIV-1 DNA阳性样本，阴性参考品分别为甲型流感病毒、甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)及阴性全血样本。本产品设置了阴性质控品、HIV-1DNA阳性质控品，用于监控PCR检测试剂及环境。

（二）生产工艺及反应体系研究

　　申请人通过研究试验，包括核酸提取研究、试剂用量研究、反应条件研究、适用机型研究、样本要求等，最终确定最佳的生产工艺及反应体系。

（三）分析性能评估

　　本产品分析性能包括核酸提取纯化性能、最低检测限、精密度、准确度、分析特异性(交叉反应、竞争性干扰和干扰物质)、包容性等，申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的3批产品在所有适用机型上的性能评估资料。

　　1.核酸提取纯化性能

　　在核酸提取纯化性能评估中，申请人通过对提取试剂的核酸纯度、提取效率、提取重复性、抗干扰能力进行验证，确认试剂盒配合使用的提取试剂符合要求。

　　2.最低检测限

　　在最低检测限研究中，申请人通过对 5个HIV-1 M组基因型样本进行梯度稀释，对系列浓度样本分别进行20次重复检测，研究结果为阳性检出率为 95%的浓度水平即最低检测限为 250copies/mL;另外采用不同型别HIV-1HIV-1M组样本进行验证，确认本产品最低检测限为250 copies/mL。

　　3.精密度

　　在精密度的性能评估中，申请人在不同的适用机型上，使用三批试剂对强阳性、临界阳性水平的 HIV-1 DNA阳性样本及HIV-1DNA阴性样本进行重复检测，评价批内、批间、日内、日间、不同操作者之间、实验室内、实验室间精密度。结果为强 阳性、临界阳性浓度的HIV-1DNA阳性样本检测结果CV%值小于5%，HIV-1 DNA阴性样本检测结果均为阴性。

　　4.准确度

　　在准确度的性能评估中，申请人在不同的适用机型上，使用三批试剂与已上市同类产品及一代测序对涵盖 9 种 HIV-1 M组亚型的高、中、低浓度的HIV-1DNA阳性临床样本及HIV-1DNA阴性临床样本进行比较研究，结果符合要求。

　　5.分析特异性

　　在交叉反应及竞争性干扰中，申请人对与人类免疫缺陷病毒种属相近、引起症状相似或可能合并感染的其他病原体进行检测，包括甲型流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、巨细胞病毒、EB病毒、结核分枝杆菌、Ⅰ型单纯疱疹病毒、Ⅱ型单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、马尔内菲青霉菌、人乳头瘤病毒、人细小病毒B19、白色念珠菌、风疹病毒、肺炎支原体、新生隐球菌、HIV-2型、麻疹病毒、卡氏肺孢子菌、弓形虫、鸟分枝杆菌，对不在本试剂盒检测范围内的HIV-1型 N组及HIV-1型 O组进行检测，结果显示本试剂盒与上述病原体无交叉反应或竞争干扰。

　　在干扰物质评估中，申请人对含高浓度干扰物质的样本进行检测，结果表明血红蛋白、胆红素、甘油三酯、总 G 型免疫球蛋白、总M型免疫球蛋白、类风湿因子(RF)、抗核抗体(ANA)、人抗鼠抗体(HAMA)、乙醇以及治疗性药物(拉米夫定、阿得福韦、恩替卡韦、替必夫定、α-干扰素、依法韦仑、洛匹那韦、多替拉韦钠片、艾博韦泰、阿奇霉素、利巴韦林、伐昔洛韦、奥司他韦、阿昔洛韦、阿司匹林、洛索洛芬、布洛芬、甲氧苄啶、异烟肼、利福平、阿米卡星、更昔洛韦、磺胺嘧啶、氟康唑和地塞米松)对本产品的检测结果无干扰。

　　6.包容性

　　在包容性评估中，申请人对不同来源、不同浓度的HIV-1M组不同基因亚型的阳性临床样本进行考察，结果表明本产品可以检测HIV-1 M组不同基因亚型。

（四）阳性判断值研究

　　阳性判断值的确定：选取来自不同地区有明确诊断信息的120例临床样本进行研究，使用本产品进行检测，利用ROC 曲线法确定本产品目的基因的阳性判断值为Ct值≤43。

　　阳性判断值验证：选取来自不同地区有明确诊断信息的146例临床样本进行验证，结果表明本产品阳性判断值设置合理。

（五）稳定性研究

　　申请人对本产品的实时稳定性、开瓶稳定性、冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性进行研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时间。

　　实时稳定性：使用企业参考品对三批试剂按照技术要求检测进行研究;结果为试剂盒保存于-20±5℃, 有效期为12个月。

　　此外，申请人对产品的开瓶稳定性、冻融稳定性、运输稳定性和样本稳定性分别进行了研究，结果显示，产品的性能均满足产品说明书声称的要求。

三、临床评价概述

　　申请人在武汉市传染病医院、福建医科大学孟超肝胆医院、荆州市疾病预防控制中心和深圳市疾病预防控制中心共四家机构完成了临床试验。本次临床试验共纳入1269例全血样本，主要为疑似HIV感染的人群、HIV感染的不同进展阶段的人群(包括急性期、无症状感染期及艾滋病期病例)和抗体筛查阳性且WB结果不确定人群。临床试验共分为两部分：

　　第一部分：采用试验体外诊断试剂与Sanger测序进行比较研究试验，验证本产品的临床性能。试验结果显示，申报产品与对比方法的阳性符合率为100.00%[95%CI99.35%~100.00%]，阴性符合率为99.12%[95%CI98.09%~99.60%]，总符合率为99.53%[95%CI98.97%~99.78%]。

　　第二部分：采用试验体外诊断试剂与临床参考标准进行比较研究试验，验证本产品的临床性能。试验结果显示，申报产品 与 临 床 参 考 标 准 的 阳 性 符 合 率 为 96.90%[95%CI95.20%~98.00%]， 阴性符合率为100.00%[95%CI99.42%~100.00%]，总符合率为98.50%[95%CI97.67%~99.04%]。

　　综上所述，试验体外诊断试剂的临床试验结果满足技术审评要求。

四、产品受益风险判定

　　申请人对已知危险(源)进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险(源)的风险是否达到可接受水平，对合理可行降低的风险、不经过风险/收益分析既判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施进行实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

　　1.预期用途：本产品用于体外定性检测人全血样本中的人 类免疫缺陷病毒1型脱氧核糖核酸(HIV-1 DNA)(仅M组)。

　　本产品仅用于 HIV-1 型(M 组)感染的辅助诊断，临床医生可参考本产品检测结果，结合病例的实际情况及多方检查结果进行综合判断。本产品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。本产品不可作为血液或血液制品HIV筛查使用。

　　2.警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。