HER2抗体试剂及检测试剂盒（免疫组织化学法）非临床研究技术审评要点（征求意见稿）（2026年最新版）

　　本审评要点是HER2抗体试剂及检测试剂盒(免疫组织化学法)安全性、有效性和质量控制方面有重要影响的技术要求/审评共识的文件，通过综合分析HER2抗体试剂(免疫组织化学)的风险和受益信息和免疫组化、肿瘤伴随诊断领域的科学研究，提炼汇总为本文件，用于规范技术审评工作，统一技术审评尺度。

　　本审评要点是对HER2抗体试剂及检测试剂盒(免疫组织化学法)预期能达到安全和性能指标的验证/确认要求，供注册申请人准备注册申报资料的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，需在遵循法律规章、规范性文件和强制性医疗器械标准的前提下，结合产品的具体特性，使用本审评要点。

　　本审评要点是在当前认知水平下制定的。随着技术审评经验的积累和科学技术的不断发展，本审评要点的相关内容也将适时地调整或及时转化为注册审查指导原则。

一、适用范围

　　本审评要点适用于利用免疫组织化学法, 对病理组织切片中HER2抗原进行检测的抗体试剂的注册申报。此类试剂为特异性单克隆或多克隆抗体，或抗体与显色系统、对照试剂、质控片(如有)及其它辅助试剂一同包装成试剂盒形式的检测试剂，临床上用于乳腺癌等肿瘤患者HER2靶向治疗药物的伴随诊断。该类产品分类编码为6840,一级序号为06，二级序号为06-06016，管理类别为Ⅲ类。

　　对于采用其他方法学的HER2检测试剂，可能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，申请人应参照本指导原则，根据产品特性对适用部分进行评价，并补充其他的评价资料。

二、审评主要关注点

　　(一)综述资料

　　综述资料主要包括概述、产品描述、预期用途、申报产品上市历史及其他需说明的内容。其中，产品描述中应描述产品与疾病和治疗的关系，以文献的形式阐述HER2检测的临床意义。预期用途中应描述用于适用癌种的HER2靶向药物的伴随诊断;产品描述中应详述检测原理、产品主要研究结果的总结和评价、参加国内外质控机构的质控活动情况、与同类和/或前代产品的比较等。

　　建议以列表的方式进行与同类和/或前代产品的比较分析，比较境内外已批准上市试剂和注册申报产品的克隆号、抗体的性质(如种属来源、单克隆抗体，IgG1型)、适用的肿瘤及组织类型、预期用途、判读方式、产品主要性能等方面的主要区别。

　　(二)非临床资料

　　1.产品技术要求及检验报告

　　产品技术要求应主要包括以下性能指标：外观、符合性、批内重复性、批间重复性等。其中“符合性”和“重复性”指标，应明确采用包含不同表达水平(至少包括0、1+、2+、3+不同表达水平阳性样本)的肿瘤组织类型组织片进行检测。申报试剂如有适用的国家标准、行业标准，则产品技术要求不得低于上述标准要求。另外，产品技术要求中应以附录形式明确主要原材料及生产工艺的要求。

　　按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》的要求编写产品技术要求，并提交三个不同批次符合产品技术要求的全项目检验报告，检验可以委托有资质的医疗器械检测机构进行或自检。提交资料应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》《医疗器械自检管理规定》(如适用)等相关文件的要求。

　　2.分析性能研究

　　注册申请人应采用在符合质量管理体系的环境下生产的试剂盒进行所有分析性能研究，提交具体研究方法、试验方案、试验数据、统计分析等详细资料。对于适用多个机型的产品，应提供所有适用机型的性能评估资料。如申报产品适用于手动和自动过程，需分别对手动和自动操作的性能进行研究。

　　分析性能评估所用样本的基本信息均需明确，例如样本类型、组织类型、细胞片的制备与稀释方式(如适用)、表达水平及确定方法等。分析性能评估用样本应为组织切片、组织芯片，应提供商业化组织芯片相关信息(如生产商、货号等)。

　　2.1样本稳定性

　　此部分应至少包括所有适用的组织类型切片在不同储存条件下的实时稳定性研究，研究样本应包含不同表达水平HER2阳性样本和阴性样本。研究所用切片的制备应采用与说明书一致的方法，如切片的保存温度范围覆盖冷藏和室温，应分别进行稳定性研究，其中室温研究应在声称的最高温度条件下进行。

　　申请人可通过提交文献或进行实时稳定性研究的方式，支持说明书中蜡块稳定性的声称。

　　2.2适用的样本类型

　　明确适用的病理组织学样本要求。

　　2.3准确度

　　通常采用方法学比对方式,将申报试剂与诊断准确度标准或已上市同类产品，同时检测一定数量的阴、阳性临床样本,通过统计阴性符合率、阳性符合率比较检测结果的一致性。研究需纳入不同HER2表达水平(0、1+、2+、3+)的样本,阳性样本还需覆盖不同染色强度、不同阳性肿瘤细胞百分比以及干扰样本,确保比对结果的全面性与代表性。

　　2.4免疫反应性

　　2.4.1正常组织：对30种正常人体组织(见表1)，每种组织类型不少于3例，进行特异性评价，同时对着色位置及染色特点进行描述。

　　表1 正常组织列表

中枢神经系统	脑、大脑（灰质与白质神经元、胶质等）
	脑、小脑
内分泌系统	肾上腺（皮质与髓质）
	卵巢
	胰腺（胰岛与外分泌胰腺）
	甲状旁腺
	垂体（腺垂体与神经垂体）
	睾丸
	甲状腺（滤泡上皮、滤泡旁细胞、胶体等）
乳 腺	乳腺（乳腺小叶、乳腺管、肌上皮细胞等）
造血组织	脾
	扁桃体
	胸腺（幼儿）
	骨髓（淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞、粒细胞、红系祖细胞、巨核细胞、肥大细胞、破骨细胞、成骨细胞）
呼吸系统	肺（支气管、细支气管、肺泡等）
心 血 管	心脏
消化系统	食管
	胃
	小肠（回肠、空肠或十二指肠）
	结直肠
	肝脏（门静脉、肝细胞等）
	唾液腺
泌尿生殖系统	肾
	前列腺
	子宫（宫体、宫颈）
	膀胱
骨骼肌肉	骨骼肌
皮 肤	皮肤 （表皮、 附件、真皮）
外周神经系统	外周神经
间皮细胞	胸壁、腹壁、心包膜或胃肠、心脏与/或肺样本表面内层细胞

　　2.4.2非正常组织：对相关良性、恶性病变组织(示例见表2)进行特异性评价。如有采用申报产品为试验材料进行研究的相关文献资料，也可提交文献资料作为抗体试剂或检测试剂盒与非正常组织的免疫反应性的支持资料。

　　表2 非正常组织列表

脊索瘤

胚胎瘤

恶性室管膜瘤

胶质母细胞瘤

肝母细胞瘤

肝细胞癌

胰岛细胞瘤

间质瘤

平滑肌肉瘤

淋巴瘤

淋巴瘤（间变性大细胞、弥漫B细胞、霍奇金和非霍奇金）

髓母细胞瘤

髓样癌

黑色素瘤

脑膜瘤

间皮瘤

神经母细胞瘤

纤维神经瘤

骨肉瘤

嗜铬细胞瘤

原始神经外胚层

肾肿瘤（乳头状、透明细胞）

横纹肌肉瘤

精原细胞瘤

印戒细胞癌

鳞状细胞癌（宫颈、头颈、肺等）

滑膜肉瘤

胸腺瘤

过渡细胞癌

腺癌（乳腺、胃、结直肠等）

肾上腺皮质癌

星形细胞癌

基底细胞癌

软骨肉瘤

　　对于I级浸润性导管癌、经典型浸润性小叶癌、小管癌等非靶组织,检测结果应呈阴性;同时需评估正常组织中是否存在免疫细胞的非特异性染色。

　　2.5特异性

　　2.5.1交叉反应

　　对HER家族其他成员(如HER1、HER3、HER4)及其他结构类似物进行交叉反应研究，评估是否发生非特异性染色。

　　2.5.2特异性识别研究

　　采用免疫印迹法或酶联免疫法等方法验证检测试剂可特异性检测HER2的性能

　　2.5.3干扰性

　　评估检测过程中可能对最终染色结果产生影响的干扰物质。内源性干扰包括如生物素、内源性过氧化物酶等。样本前处理过程可能引入的干扰。

　　采用适用的肿瘤组织来源的细胞系或组织样本进行特异性研究，并明确组织类型的确定方法，如采用商业化组织芯片，需提交相应的信息。

　　2.6精密度

　　2.6.1检测内精密度：对连续切片的预期组织类型样本，进行检测重复性研究。包括染色强度、阳性肿瘤细胞百分比及着色位置和胞膜染色完整性。

　　2.6.2检测间精密度：对可能影响检测精密度的主要变量进行验证，包括不同批次间(不少于3批次)、不同仪器间、日间、操作者间和阅片者间。同一阅片者两次阅片之间应设置合理的遗忘期。

　　2.6.3建议对不同染色强度、不同阳性细胞百分比及HER2阴性的乳腺癌样本进行包含染色位置、胞膜染色完整性、染色强度和阳性肿瘤细胞百分比数的精密度研究，至少包括HER2阴性样本、1+、2+、3+阳性样本。研究数据应采用合理的统计方法和95%双侧置信区间，制定适当的接受标准。

　　2.7灵敏度

　　对HER2表达弱阳性的样本进行灵敏度分析。可选择不少于5例HER2表达水平≤2+ 的样本进行灵敏度研究，建议包含1-10%的阳性细胞百分比样本及弱染色强度样本。

　　2.8反应体系

　　2.8.1样本采集和处理

　　简述样本的固定、包埋的要求，包括但不限于固定剂的选择、固定时间和温度要求、包埋条件等。上述条件要求可引用规范性操作手册，也可通过研究确定。

　　建议申请人对切片厚度、载玻片的要求进行研究，或提交相关文献资料，确定适用的切片厚度范围和载玻片类型。

　　2.8.2抗原修复

　　详述抗原修复方法和参数条件，包括方法、时间、温度、pH值的确定依据。如抗原修复液可重复使用，应提交重复使用次数限定的研究资料。

　　2.8.3最适抗体滴度/浓度确定的研究。

　　2.8.4检测体系反应条件确定

　　申请人应考虑脱蜡水化、酶阻断、抗体孵育、显色、复染等步骤对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。常规免疫组织化学检测步骤的确定，可引用行业和企业内部规范性操作手册或文献，但应对确定后的检测步骤进行性能验证。

　　2.8.5质量控制

　　申报产品应建立可有效监测染色过程的质量控制方法，明确推荐用作质控的组织类型和制备方法，提交染色结果可接受标准确定的研究资料。明确同型对照试剂染色结果的可接受标准，并提交研究资料。

　　3.稳定性研究资料

　　稳定性研究主要包括实时稳定性(有效期)、运输稳定性、开瓶(开封)稳定性、机载稳定性和稀释稳定性(如适用)研究，注册申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。对于实时稳定性研究，应提供至少三批产品在实际储存条件下保存至声称有效期后的研究资料。

　　4.阳性判断值研究

　　提交最新的国际、国内诊疗指南等相关文献资料，根据指南明确判读流程、规则及阳性判断值，并提交采用临床样本的验证资料。提交染色特点的研究资料，包括阳性样本着色颜色、染色部位、背景信息及不同强度阳性组织的染色特点，并附典型免疫组化图。

　　5.其他资料

　　5.1主要原材料研究资料

　　此产品的主要原材料包括第一抗体、显色系统、封闭液、同型对照抗体、质控片、企业内部质控片等。应提供主要原材料的选择与来源、制备过程、质量控制标准等相关研究资料。考虑到产品注册单元的不同，申请人应根据产品注册单元的实际情况，递交相应原材料资料。如主要原材料为企业自制，应提供其详细制备过程;如主要原材料源于外购，应提供资料包括：选择该原材料的依据及对比筛选试验资料、生产商提供的质量标准、出厂检验报告，以及该原材料到货后的质量检验资料，供应商应固定，不得随意更换。

　　5.1.1第一抗体

　　5.1.1.1克隆选择研究

　　应提交克隆筛选试验资料，包括试验方法、筛选原则、与公认抗体的比较研究等。应明确抗体所针对的抗原表位、抗体制备所用免疫原。

　　5.1.1.2抗体性质鉴定

　　应提交抗体性质鉴定研究资料，包括：抗体的特异性、亲和常数及效价、抗体的类型及亚型等的验证。提供抗体识别位点的验证。申请人可通过放射性免疫分析法、双向琼脂扩散法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法、凝胶电泳等方法进行研究。

　　5.1.2酶标第二抗体系统的选择及验证

　　检测试剂盒中的第二抗体系统一般均为外购，应详述酶标第二抗体系统的确定依据，明确外购方名称，提交外购方出具的检验证书，详述申请人对酶标第二抗体系统相关主要原材料的技术指标。

　　5.1.3质控片(如适用)

　　建议在试剂盒中设置质控片，建议质控片设置包含0、1+、2+、3+不同评分的对应组织或细胞系。应提交质控片细胞或组织类型选择的依据、质控片HER2表达情况确定的研究资料和质控片染色接受标准确定资料。

　　5.1.4同型对照抗体(如适用)

　　为有效识别检测过程中可能出现的非特异性染色，建议试剂盒(配套)包含同型对照抗体。简述同型抗体的动物源性、亚型、浓度、纯度等基本信息。

　　5.1.5封闭液

　　封闭液应能够封闭非特异结合、内源性酶活性或内源性生物素等。如不包含封闭液，需说明解决非特异结合及干扰的措施、原理、方法，并提交验证资料。

　　5.1.6其他主要原辅料的选择及验证资料，如牛血清白蛋白、抗原修复液、抗菌剂等。

　　该类主要原辅料一般均为外购，应说明有生物活性的原辅料的外购方名称，提交外购方出具的检验证书，详述申请人对每一种原辅料的质量要求。

　　5.1.7企业内部参考品/质控片

　　详述企业内部质控片的组成，包括组织类型、例数和表达水平。应提供对企业内部质控片组织类型和表达水平的确定依据，建议采用临床上普遍认为质量较好的同类试剂进行确认。企业内部质控片，应包含所有适用的肿瘤组织类型、不同表达水平和染色特征。

　　5.2生产工艺研究资料

　　5.2.1主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。

　　5.2.2第一抗体制备的详细研究资料(如适用)。

　　5.2.3如包括其他酶标二抗、显色系统、对照试剂、质控片(如有)及其它辅助试剂，则详述其生产工艺确定的研究资料。

三、参考文件

　　[1]国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心.雌激素受体、孕激素受体抗体试剂及检测试剂盒注册审查指导原则: 国家药监局器审中心2025年第4号通告[Z].

　　[2]国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心.PD-L1抗体试剂及检测试剂盒注册审查指导原则：国家药监局器审中心2025年第29号通告[Z].

　　[3]YY/T 1181-2021，免疫组织化学试剂盒[S].

　　[4]国家市场监督管理总局.体外诊断试剂注册与备案管理办法：国家市场监督管理总局令第48号[Z].

　　[5]国家药品监督管理局.关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告2021年第122号[Z].

　　[6]国家药品监督管理局.国家药监局关于发布体外诊断试剂分类目录的公告2024年第58号[Z].

　　[7]中国抗癌协会国际医疗与交流分会,中国医师协会肿瘤医师分会乳腺癌学组.人表皮生长因子受体2 低表达乳腺癌临床诊疗共识(2022 版)[J].中华肿瘤杂志,2022,44 (12):1288-1295

　　[8]中国临床肿瘤学会指南工作委员会.中国临床肿瘤学会(CSCO)乳腺癌诊疗指南2025 [M].北京:人民卫生出版社,2025:3199.

　　[9]乳腺癌诊疗指南(2022年版)