人EGFR/ALK/ROS1/MET/KRAS基因突变检测试剂盒创新医疗器械注册技术审评报告2025年艾德生物版

　　本产品是人EGFR/ALK/ROS1/MET/KRAS基因突变检测试剂盒(多重荧光PCR法)，属于第三类体外诊断试剂，由厦门艾德生物医药科技股份有限公司申请注册。该试剂盒用于体外定性检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本DNA/RNA中人类EGFR、KRAS、ALK、ROS1基因突变和MET基因14号外显子跳跃突变，具体突变位点信息详见产品说明书。其中，EGFR基因19号外显子缺失突变和L858R突变可用于盐酸厄洛替尼片和甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;EGFR基因T790M突变可用于甲磺酸奥希替尼片的伴随诊断;ALK基因融合和ROS1基因融合可用于克唑替尼胶囊的伴随诊断;MET基因外显子14跳跃突变可用于谷美替尼片和盐酸特泊替尼片的伴随诊断;KRAS基因G12C突变可用于枸橼酸戈来雷塞片和格索雷塞片的伴随诊断。产品包装规格为10测试/盒，检验原理基于多重荧光PCR法，采用ADx-ARMS技术检测DNA突变，并通过两步RT-qPCR方法检测RNA基因融合。

　　产品概述

　　产品主要组成成分包括RNA基因融合检测和DNA基因突变检测两部分。RNA基因融合检测组成成分包括LET反应条A(LET A)、LET逆转录液I、LET逆转录液II、LET逆转录酶、LET混合酶A和LET阳性对照A;DNA基因突变检测组成成分包括LET反应条B(LET B)、LET混合酶B和LET阳性对照B。试剂盒采用8联PCR管设计，具体组成详见下表。

　　LET反应条A和B的管号及检测目标如下：

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　　LET反应条A：①号管检测ALK基因融合(FAM、VIC信号)，⑤⑥号管检测ROS1基因融合(FAM、VIC信号)，⑦号管检测MET基因14号外显子跳跃突变(FAM、VIC信号)。

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　　LET反应条B：①~③号管检测EGFR基因突变(FAM、VIC、ROX信号)，⑤号管检测KRAS基因突变(VIC、ROX信号)，⑧号管为外控(FAM、ROX信号)。

　　产品预期用途详见说明书，伴随诊断用途的基因变异类型及靶向药物如下：

　　检验原理：RNA检测通过两步RT-qPCR方法，DNA检测通过ADx-ARMS®技术，利用特异引物和荧光信号实现突变检测，PCR系统含UNG酶防污染。

　　临床前研究概述

　　主要原材料为外购，包括引物、探针、酶类等，经功能性试验筛选合格。企业参考品设置如下：

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　　阳性参考品：142支，涵盖所有可检出融合/突变类型。

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　　阴性参考品：20支，包括临床FFPE样本和非人基因组样本。

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　　检测限参考品：45支。

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　　精密度参考品：28支。

　　生产工艺和反应体系经优化确定。分析性能评估结果：

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　　准确度：阳性/阴性符合率均为100%。

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　　精密度：批内、批间、人员间等精密度符合率100%，变异系数≤5%。

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　　最低检测限：3300拷贝FFPE DNA中1~5%基因突变、60~600 ng FFPE RNA中150拷贝RNA可检出。

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　　分析特异性：无交叉反应;干扰物如药物、血红蛋白等无影响。

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　　核酸提取性能：配套试剂符合要求。

　　阳性判断值通过ROC曲线确定，详见下表：

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　　LET反应条A：FAM信号Ct<30为阳性(MET基因Ct<27)。

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　　LET反应条B：FAM/ROX信号分阳性A区(Ct<30)、阳性B区(Ct 30~33且△Ct符合要求)，否则为阴性。

　　稳定性研究显示，产品在-20±5℃下有效期6个月，运输、开瓶稳定性符合要求。

　　临床评价概述

　　临床试验在4家机构开展，分为六部分：

　　1.

　　与二代测序对比：纳入862例样本，EGFR、ALK、ROS1、MET、KRAS基因检测阳性符合率98.1%~100%，阴性符合率99.6%~100%。

　　2.

　　与原研伴随诊断试剂对比：EGFR、ALK、ROS1基因检测阳性符合率100%，阴性符合率99.1%~100%。

　　3.

　　桥接试验(盐酸特泊替尼片)：416例样本，阳性符合率99.3%，阴性符合率98.2%;ORR为53.4%。

　　4.

　　桥接试验(谷美替尼片)：217例样本，阳性/阴性符合率均为100%;ORR为65.2%。

　　5.

　　同步开发(枸橼酸戈来雷塞片)：117例KRAS G12C突变患者，ORR为49.6%。

　　6.

　　同步开发(格索雷塞片)：119例KRAS G12C突变患者，ORR为52.0%。

　　产品受益风险判定

　　受益：作为多靶点伴随诊断试剂，筛选用药人群，使NSCLC患者及时治疗。

　　风险评估：说明书已提示样本质量、操作规范等风险控制措施，剩余风险通过警示信息规避。

　　综合评价意见

　　产品符合医疗器械法规要求，安全性、有效性达标，建议准予注册。